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羊水細(xì)胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)制備方法

    羊水中含有胎兒脫落的上皮細(xì)胞，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型。目前國(guó)內(nèi)外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù)，妊娠12-30周的羊水細(xì)胞均可培養(yǎng)基成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析，*孕周為16周左右。因此時(shí)羊水增長(zhǎng)快，羊水中細(xì)胞較多，細(xì)胞培養(yǎng)易于生長(zhǎng)，而且不易損傷胎兒。國(guó)內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時(shí)間在妊娠的第16-30周。國(guó)外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時(shí)間大致計(jì)算（1ml/w）。資料表明，穿刺病例的妊娠結(jié)局、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無(wú)明顯差異。

　　（1）采樣：選擇妊娠13-14周婦女，在無(wú)菌條件下抽取羊水5ml，立即注入無(wú)菌離心管中；

　　（2）收集：離心分離細(xì)胞，1000rpm10分鐘，去上清，留0.5ml，輕打混勻；

　　（3）接種：30mm培養(yǎng)基皿中放蓋玻片1張，每片滴混勻的細(xì)胞液1-2滴，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘；

　　（4）培養(yǎng)：取出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml，靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞生殖狀況并定時(shí)換液，5-10天后，可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)；

　　（5）終止培養(yǎng)：當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml，作用10-12小時(shí)；

　　（6）低滲：倒掉培養(yǎng)液，加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液5ml，37℃溫育30分鐘，鏡下可見(jiàn)脹大的羊水細(xì)胞，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液預(yù)固定；

　　（7）固定：倒掉低滲液，加5ml固定液固定30分鐘以上，反復(fù)3次；

　　（8）干燥：將附有細(xì)胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)基皿中，置80℃烤箱處理2-3小時(shí)；

　　（9）膠片：將附有細(xì)胞的蓋玻片用樹(shù)脂膠封固于玻片上，正面朝外，小心細(xì)胞破壞。